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細胞培養常規方法


細胞培養常規方法

CELLCELL 2015-10-08

1. 凍存細胞的復蘇

  1. 應遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調至37-37。5度,取出凍存的細胞迅速放入后將細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化。

  2. 在無菌臺內將完全培養基加入50ml的小培養瓶內,約5ml左右,然后用無菌吸管從凍存管內取出細胞,置培養并內輕輕搖晃,使細胞均勻后置培養箱內培養。

2. 傳代:

  1. 貼壁細胞:

  2. 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml完全培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入完全培養基后繼續培養或實驗。

  3. 懸浮細胞:

  4. 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入完全培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入完全培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入完全培養基繼續培養。

3. 凍存 

將貼壁細胞消化后離心收集,懸浮細胞直接離心收集,以完全培養基或胎牛血清重懸細胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1~2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過夜。次日保存到液氮中。


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